Células mononucleares de sangre periférica en mujeres con cáncer de mamaEstudio de la expresión génica de MMP1 y MMP11 y su interacción in vitro con células tumorales y fibroblastos

Resumen

Antecedentes al tema y objetivos: Las células inflamatorias mononucleares intratumorales (CMIs) y los fibroblastos asociados al cáncer (FACs) son componentes celulares clave del estroma tumoral que influyen en el comportamiento del tumor. El fenotipo de las CMIs, basado en las expresiones de MMP1 y MMP11 expresión, se ha asociado con el desarrollo de metástasis ganglionares y metástasis hematógenas, respectivamente, en el cáncer de mama. Puesto que las CMIs intratumorales derivan de las de la sangre periférica (CMISPs), nos proponemos los siguientes objetivos principales: -Evaluar las expresiones génicas de MMP1 y MMP11 por CMISPs de mujeres con cáncer de mama en comparación con las de mujeres sanas. -Analizar la posible relación entre la expresión génica de MMP1 y MMP11 por CMISPs y la tinción inmunohistoquímica para esas proteasas en las células CMIs intratumorales en mujeres con cáncer de mama. -Estudiar los cambios de expresión génica de MMP1 y MMP11 por las células mononucleares inflamatorias de sangre periférica, tanto en mujeres con cáncer de mama como en mujeres controles, tras su co-cultivo con líneas celulares de cáncer de mama MCF-7 o MDA-MB-231. -Estudiar los cambios de expresión génica de MMP1 y MMP11 por las CMISP, tanto en mujeres con cáncer de mama como en mujeres controles, tras su co-cultivo con fibroblastos de mujeres controles (FNs), como procedentes del estroma de carcinomas mamarios (FACs). -Investigar la expresión de factores inflamatorios (IL1, IL6, IL17, IFNß y NFB) en las líneas celulares de cáncer de mama tras su co-cultivo con CMISPs, tanto de mujeres con cáncer de mama como de mujeres controles. -Investigar la expresión de factores inflamatorios (IL1, IL6, IL17, IFNß y NFB) en fibroblastos procedentes de tejidos mamarios tras su co-cultivo con CMISPs, tanto de mujeres con cáncer de mama como de mujeres controles. Materiales y métodos: Se tomaron muestras de sangre de mujeres con diagnóstico reciente de cáncer de mama invasivo (n = 54) y de mujeres sanas (n = 28). Las expresiones génicas de MMP1 y MMP11 por CMISPs y factores inflamatorios (IL1, IL6, IL17, IFNß y NFB) por líneas celulares de cáncer de mama (MCF-7 y MDA-MB-231), CAF y NF, se analizaron mediante qRT-PCR, antes y después del co-cultivo. Resultados: No existieron diferencias significativas de la expresión génica de MMP1 entre las CMISPs de mujeres con cáncer de mama y de mujeres sanas. Sin embargo, un 25,93% de las mujeres con cáncer de mama mostraron una expresión de MMP11 significativamente más elevada en comparación con las mujeres control. No existió relación significativa entre las expresiones génicas de MMP1 y MMP11 por las CMISPs y la tinción inmunohistoquímica para esas proteasas en las CMIs intratumorales en mujeres con cáncer de mama.Tras el co-cultivo con líneas celulares de cáncer de mama (MCF-7 o MDA-MB-231), durante 48 horas, se produce un incremento significativo de la expresión génica de MMP1 o de MMP11 por las CMISPs sangre periférica de mujeres controles, pero no de mujeres con cáncer de mama. Tras el co-cultivo con fibroblastos de mujeres controles, como con los procedentes del estroma de carcinomas mamarios o del borde tumoral no neoplásico, durante 48 horas, se produce un incremento significativo de la expresión génica de MMP1 por las CMISPs de mujeres con cáncer de mama, siendo mayor tras el co-cultivo con los FACs en comparación con las otras dos poblaciones de fibroblastos. Sin embargo, no se encontraron diferencias significativas de la expresión génica de esta MMP cuando los co-cultivos se realizaron con CMISPs de mujeres controles. No se encontraron diferencias significativas en la expresión génica de factores inflamatorios en las líneas celulares de cáncer de mama tras su co-cultivo con CMISPs, tanto de mujeres con cáncer de mama como de mujeres controles. Sin embargo, se ha detectado un incremento de la expresión génica de IL1, IL6 y NFB por los FACs tras co-cultivo con las células mononucleares inflamatorias de sangre periférica de mujeres con cáncer de mama. Aunque en los FNs se produce en cambio un incremento de la expresión de IL6, se produce también un decremento de la expresión de IL1, IL17, IFNß y NFB. Conclusiones: Los CMISPs de pacientes con cáncer de mama muestran fenotipos moleculares y funcionales relacionados con la progresión tumoral, especialmente a través de su interacción con los CAFs. Estos hallazgos evidencian la importancia de la interacción de las células del estroma de cara a promover un comportamiento tumoral agresivo. Así pues, de los resultados del presente estudio se derivar futuros estudios de interés clínico sobre el diagnóstico, pronóstico e identificación de nuevas dianas terapéuticas en el cáncer de mama.