Purificación y caracterización de la actividad 3'-pretRNAasa de mamíferos

Resumen

SE HA PURIFICADO Y CARACTERIZADO LA ENZIMA RESPONSABLE DEL PROCESAMIENTO DEL EXTREMO 3' DE PRETRNAS DE MAMIFEROS: RATON, RATA Y HUMANO. LA ACTIVIDAD ENZIMATICA PARECE RESIDIR EN UN UNICO POLIPEPTIDO DE 97.000 DALTONS CON UN PESO MOLECULAR NATIVO SIMILAR EN EL CASO DE LAS ENZIMAS PURIFICADAS A PARTIR DE HIGADO DE RATA Y CELULAS KB HUMANAS Y DE 170.000 DALTONS PARA LA ENZIMA PURIFICADA DE TUMOR ASCITICO DE EHRLICH, DEBIDO EN ESTE CASO A LA ASOCIACION AL POLIPEPTIDO DE 97.000 DALTONS DE OTRO DE 83.000 DALTONS. LAS CARACTERISTICAS QUE PRESENTA ESTA ENZIMA 3'-PRETRNASA EN ESTOS SISTEMAS SON: 1-ACTUA PREFERENCIALMENTE SOBRE PRETRNAS PROCESADOS PREVIAMENTE EN EL EXTREMO 5' DE LOS MISMOS; 2-EL CORTE QUE LLEVA A CABO SOBRE LOS SUSTRATOS PRETRNAS PROCESADOS EN SU EXTREMO 5' ES DE NATURALEZA ENDONUCLEOLITICA; 3-ACTUA SOBRE AL MENOS DOS TIPOS DISTINTOS DE PRECURSORES DE TRNAS PROCESADOS EN SU EXTREMO 5'; 4-REQUIERE LA PRESENCIA DE CATIONES DIVALENTES, SELECTIVAMENTE MG2+ SOBRE MN2+ Y CA2+, A UNA CONCENTRACION OPTIMA DE 2-5MM. REQUIERE CATIONES MONOVALENTES A UNA CONCENTRACION OPTIMA DE 30MM; 5-LOS ANTICUERPOS POLICIONALES DE TUMOR ASCITICO DE EHRLICH, DIRIGIDOS CONTRA EL POLIPEPTIDO DE 97.000 DALTONS, RECONOCEN EL MISMO POLIPEPTIDO DE LA ENZIMA DE RATA, HUMANO Y X.LAEVIS. ESTO INDICA UN ALTO GRADO DE CONSERVACION DE ESTA PROTEINA EN CUANTO A EPITOPOS Y ESTRUCTORA. 6-POR EXPERIMENTOS DE INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA SE HA LOCALIZADO ESTA PROTEINA EN UN NUCLEO CELULAR DE CELULAS SWISS 3T3. 7-SE HA DETECTADO LA PRESENCIA DE AUTOANTICUERPOS CONTRA LA PROTEINA DE 97.000 DALTONS DE EAC DE RATON Y DE HIGADO DE RATA EN SUEROS DE PACIENTES CON LUPUS ERITEMATOSO SISTEMICO. SE HA CARACTERIZADO Y PURIFICADO PARCIALMENTE UNA NUEVA ACTIVIDAD NUCLEASA QUE PROCESA EL EXTREMO 3' DE LOS PRETRNAS SIN REQUERIR PROCESAMIENTO PREVIO DEL EXTREMO 5' DE LOS MISMOS. ESTA NUEVA ACTIVIDAD ENZIMATICA SE PODRIA DENOMINAR 3'-PRETRNASA INDEPENDIENTE DEL PROCESAMIENTO EN