Analisis molecular de los elementos promotores del gen del receptor de glucocorticoides humano

Résumé

Se han realizado una serie de construcciones quimericas pgrpluc en las que la transcripcion del gen de la luciferasa esta dirigida por fragmentos de diferente longitud del promotor del receptor de glucocorticoides humano (hgr). La actividad transcripcional de las quimeras se ha ensayado mediante experimentos de expresion transitoria en tres lineas celulares: cv-1, nih3t3 y hela, habiendose identificado una region rica en g+c de 600 bp como responsable de la actividad promotora basal. Mediante experimentos de mobility shift se han identificado en esta region 4 cajas gc que interactuan especificamente con el factor de transcripcion sp1; los puntos de contacto de esta proteina con el dna se han determinado mediante experimentos de footprinting. El mecanismo de regulacion homologa de la expresion del hgr se ha analizado por medio de transfecciones en presencia de dexametasona, que solo producia una leve disminucion de la actividad del promotor en la linea celular cv-1, mientras que, sorprendentemente, aumentaba esta actividad en celulas hela. El compuesto ru 486 producia un efecto similar al inducido por la dexametasona. El tratamiento con forskolina producia un incremento en la actividad transcripcional del promotor del hgr, habiendose identificado, como responsable de tal activacion, un elemento de respuesta a camp situado a 1,0 kb del sitio cap. El efecto del receptor de mineralocorticoides (mr) sobre la transcripcion del hgr se ha estudiado cotransfectando, junto con los plasmidos pgrpluc, un vector de expresion del hmr en celulas cv-1. El tratamiento de las celulas transfectadas con aldosterona no produjo variaciones significativas en la actividad del promotor del hgr.