Caracterización de la replicación dependiente de recombinación en el bacteriófago SPP1

Resumen

La replicación del bacteriófago de Bacillus subtilis, SPP1 es de dos modos: tipo theta y tipo sigma. Se ha caracterizado la replicación tardía, tipo sigma, llegando a las siguientes conclusiones: 1,- G34.1P y G35P forman parte de la familia de recombinasas RecET/Redab/Rad52 pero no complementan a las estirpes mutantes en formación de intermedios de recombinación de B.subtilis en recA, recU y recO. El sistema G34.1P y G35P de SPP1 ha podido evolucionar hacia un tipo de recombinación diferente al de la célula huésped ya que necesita como producto el establecimiento de la replicación tipo sigma. También puede deberse a la necesidad de interacciones específicas protéina-proteína que G34.1P y G35P no pueden realizarse. 2,- Se han clonado y purificado 2 proteínas mutadas de G35P. Estas aún mantienen el/los dominios de oligomerización y unión a ADN. Sin embargo la proteína G35P95-287 carece de actividad de anillamiento de cadenas. La región de apareamiento de cadenas probablemente se sitúe en el N-terminal de la proteína. 3,- G36P en un dímero que une con alta afinidad ADNcs de longitudes superiores a 41-nt. G36P compite con G35P por la unión a ADNcs y parece estar reclutada por esta. 4,- Se ha clonado y purificado G34.1P. G34.1P se presenta como dímero en solución. Se ha caracterizado su actividad exonucleasa: A,- G34.1P es una exonucleasa alcalina por polaridad 5' a 3' dependiente de Mg2+. B,- Digiere con mayor eficiencia ADNcd que ADNcs. C,- Necesita de la presencia de un fosfato en el extremo 5' para su unión. D,- La actividad exonucleasa en ADNcd es dependiente de la secuencia. 5,- G36P inhibe la acción de G34.1P sobre en ADNcs por la protección física de este. G36P dirige la actividad exonucleasa de G34.1P sobre en ADNcs por la protección física de este. G36P dirige la actividad exonucleasa de G34.1P hacia un sustrato útil. 6,- G35P estimula la unión de G34.1P al ADNcd, y favorece la