Influencia de los cambios ambientales en la fisiología y virulencia de yersinia ruckeri

Resum

La yersiniosis es una enfermedad que causa importantes pérdidas económicas en la acuicultura de salmónidos a nivel mundial. El agente etiológico de esta patología es Yersinia ruckeri. Los mecanimos relacionados con la virulencia de esta bacteria son poco conocidos, por lo que es necesario ahondar en su estudio y desarrollar nuevas estrategias de prevención y tratamiento. En el presente trabajo de investigación se planteó como objetivo, el identificar y estudiar genes y reguladores de estos, cuya expresión fuese mayor bajo algunas de las condiciones en las que se desarrolla el proceso infeccioso. Una de estas es la presencia predominante de un ambiente reductor en el tracto gastrointestinal de los animales. Para ello, se construyó una genoteca de mutantes por transposición con el transposón Tn5luxlac, en la que se identificaron varios genes que se inducen en este ambiente. Entre ellos, el gen speF, que codifica una ornitina descarboxilasa, uno de los enzimas clave en la síntesis de poliaminas, y que se presenta en operón con el gen que codifica el antiportador de ornitina/putrescina, potE. Además, mediante la tecnología IVIS Lumina, que detecta la luminiscencia emitida por la luciferasa, se comparó el grado de inducción del gen speF en diferentes tejidos de trucha arcoíris. Por otro lado, se identificaron y analizaron reguladores de genes cuya expresión era mayor a 18 ˚C, temperatura en torno a la cual aparecen los brotes infecciosos, que a 28 ˚C, temperatura óptima de crecimiento de la bacteria. Para ello, se elaboró una estrategia consistente en la generación de dobles mutantes, utilizando dos transposones distintos, cada uno de ellos portadores de genes indicadores de la expresión promotora. De este modo, se construyeron genotecas de dobles mutantes. Entre los genes reguladores identificados se encontró el gen cpxA, el cual forma parte del operón cpxRA, un sistema de dos componentes que detecta estímulos que generan estrés en la envuelta celular, y que resultó modular al gen acrR. Finalmente, consecuencia de los resultados que se obtuvieron con la utilización de la cefotaxima como agente selectivo en los procesos de conjugación, se identificaron varios efectos que la exposición a concentraciones subinhibitorias de este antibiótico, ampliamente utilizado en clínica, tuvo sobre sobre la fisiología y la patogenicidad de Y. ruckeri. Se encontraron fenotipos y perfiles proteicos diferenciales entre la cepa que había sido expuesta a la cefotaxima y la cepa parental. Uno de estos fenotipos a resaltar, fue la completa atenuación en la virulencia. En la presente Tesis Doctoral se han obtenido resultados que ayudan a comprender un poco mejor algunos aspectos relacionados con el proceso infeccioso de Y. ruckeri, abriéndose nuevas perspectivas de futuro mediante el estudio de alguno de los genes encontrados y la aplicación de estrategias aquí desarrolladas.