Expresión de pequeños proteoglicanos ricos en leucina en el cáncer de colon

Résumé

Los pequeños proteoglicanos ricos en leucina (en adelante SLRPs por sus siglas en inglés) constituyen una familia de moléculas codificadas por 18 genes. Estas moléculas se expresan ubicuamente en las matrices extracelulares y se clasifican en cinco grupos función de propiedades estructurales y funcionales. Pueden aparecer acoplados a cadenas de glicosaminoglicanos en función de la especie específica. Se ha descrito que debido a sus habilidad intrínseca de interactuar tanto con citocinas, ligandos y receptores de superficie, los SLRPs forman parte de múltiples vías de señalización durante la morfogénesis tisular y en procesos de inmunidad innata, pero también actúan como moduladores en procesos patológicos complejos como la fibrosis o la carcinogénesis. El cáncer colorrectal (CCR) es una entidad heterogénea definida por diferencias anatómicas, funcionales y moleculares que dependen de la localización del tumor primario. Se han descrito distintas firmas moleculares, algunas asociadas con subtipos más agresivos y a localizaciones específicas del tumor primario. Varios de los marcadores que definen los subtipos moleculares de CCR muestran relación con proteoglicanos. Lo anteriormente descrito hace de especial interés el análisis de las alteraciones de proteoglicanos matricelulares como los SLRPs, con énfasis en la lateralidad del tumor primario (colon derecho vs. colon izquierdo). Existen estudios que han relacionado algunos SLRPs de forma individual con distintos tumores, pero no se ha descrito el comportamiento de estos genes como familia. En este estudio se ha llevado a cabo un análisis de las alteraciones en la transcripción diferencial de los genes que componen la familia de los SLRPs en muestras procedentes del banco de tumores del Hospital Universitario Central de Asturias de pacientes con cáncer colorrectal a quienes se les había practicado cirugía del tumor primario. Se realizó una estratificación por lateralidad entre CCR derecho (CCRd) y CCR izquierdo (CCRi). Este estudio se realizó a partir de la extracción del ARN de las células tumorales y de sus respectivos controles no tumorales del mismo individuo. Dicho ARN se utilizó para realizar reacciones de transcripción reversa y de la amplificación del material genético mediante PCR a tiempo real (qRT-PCR). Los genes que en la prueba de qRT-PCR demostraron alteraciones estadísticamente significativas fueron sometidos a técnicas de inmunohistoquímica (IHQ) para confirmar su traducción nivel proteico. Los resultados obtenidos fueron fundamentalmente: • Se identificó transcripción de prácticamente todos los genes de la familia de SLRPs o Excepto OPTC de la clase III y NYX de la clase IV • Se observaron alteraciones en la transcripción de las proteínas núcleo de SLRPs de los 5 grupos que conforman a esta familia de moléculas. o Un gen de cada grupo manifestó diferencias significativas en el tejido tumoral respecto del tejido sano. • El patrón de expresión de SLRPs fue distinto en las localizaciones preestablecidas o Las muestras correspondientes a CCRd presentaron sólo dos genes afectados BGN de la clase I y OGN de la clase III o Las muestras correspondientes a CCRi presentaron mayor número de alteraciones, observándose diferencias en 5 genes, BGN de clase I, PRELP de clase II, OGN de clase III, CHAD de clase IV y PODN de clase V. • La mayor parte de las alteraciones observadas correspondió a infrarregulación de los genes en el tejido tumoral respecto del control sano, excepto para BGN para cuyo caso el tejido tumoral mostró sobreexpresión. • Las alteraciones detectadas por PCR fueron confirmadas mediante IHQ donde se observó correspondencia en todos los casos, presentando un aumento de tinción en el tejido tumoral para BGN y una disminución marcada e incluso ausencia para los casos de PRELP, OGN, CHAD y PODN. • En cuanto al impacto clínico, la mediana de la supervivencia libre de recidiva (SLR) en el global de pacientes fue de 25,6 meses y sólo PODN mostró que cuando se infraexpresa este gen observa una mejoría en la SLR de 27,3 meses vs. 12,2 meses en aquellos donde no se ve alterado (p=0.045, OR 0.334, IC95% 0.099 - 1,127).