Aislamiento, clonación e identificación del gen codificante para una proteína de poro nuclear sobre expresada en células tumorales

Resumen

Anteriormente, nuestro grupo (Br J Cancer 77:1015-1020,1998) describio que un anticuerpo monoclonal (C6) desarrollado contra manoproteinas de choque termico de Candida albicans reaccionaba especificamente contra una proteina en celulas de cancer de ovario humano, y que esta reaccion no se daba en celulas normales. Estos resultados sugieren que el antigeno reconocido podria estar relacionado con el desarrollo tumoral. La presente Tesis Doctoral ha tenido como objetivo la identificacion de dicha proteina. Para ello, se llevo a cabo un screening en una biblioteca de cDNA de celulas tumorales humanas (HeLa, clonada en IGY11), utilizando el anticuerpo C6 como sonda. Mediante dicho procedimiento, se aislo el gen Nup88, que codifica la nucleoporina Nup88, localizada en la cara citoplasmica del poro nuclear, y cuya función es aun desconocida. El extremo N-terminal de la proteina fue clonado y expresado en bacterias, en fusion a la Glutachion-S-transferase. La proteina fue inyectada en conejos para producir anticuerpos policlonales. Se estudio el nivel de expresión de Nup88 en celulas tumorales y normales, tanto a nivel de RNA como nivel de proteinas. Como último paso de la investigación. Se realizó un estudio de expresión de Nup88 en lineas celulares humanas procedentes de diferentes organos, asi como en biopsias de diferentes tipos de tumores. Se pudo demostrar una clara sobreexpresion de RNA coo a nivel proteico (Cancer Res 59;5408-5411,1999). Dado que el locus de Nup88 se halla en 17p13,y esta region cromosomica (que contiene, entre otros, tambien el locus p53) se pierde con frecuencia durante la genesis de divesos tumores, entre ellos el cáncer de ovario, realizamos un estudio piloto sobre 51 muestras clinicas de cancer de ovario humano (Oncogene, enviado para publicacion). En el, correlacionamos los niveles de expresión Nup88 con la expresión de marcadores de las dos principales vias oncosupresoras implicadas en el cancer de ovario hu