Aplicación de técnicas miniaturizadas de cromatografía líquida a la determinación de vitaminas y provitaminas liposolubles en leche y derivados

Resumen

Se han desarrollado dos tecnicas de cromatografía liquida de alta eficacia (HPLC) para el análisis de vitaminas liposolubles en leche y derivados. Estas técnicas se basan en el empleo de columnas de pequeño diámetro: microbore y capilares que presentan un diámetro interno de 2,1 mm y 0,3 mm, respectivamente. Las ventajas que aportan estas técnicas miniaturizadas frente a la cromatografía liquida con columnas convencionales se pueden resumir en: mayor sensibilidad, eficacia, precisión y notable ahorro de disolventes. El uso de columnas capilares ha exigido realizar modificaciones instrumentales en el equipo de HPLC convencional. Estas modificaciones permiten usar cualquier tipo de columna, convencional, microbore o capilar, en un mismo sistema cromatográfico. Las técnicas desarrolladas permiten las separación y determinación simultanea de las provitaminas 7-dehidrocolesterol (provitamina D3) y ergosterol (provitamina D2) y las vitaminas liposolubles retinol, acetato de retinol, palmitato de retinol, vitamina D2, vitamina D3, vitamina E, acetato de tocoferol y vitamina K1. La baja concentración en que se encuentran las vitaminas y provitaminas liposolubles en la leche y sus derivados y la complejidad de este tipo de matrices exige una etapa previa de limpieza y preconcentracion de los analitos. Para ello se han desarrollado dos métodos alternativos: uno de ellos está basado en la extracción liquido-liquido con hexano y el otro en la extracción solido-liquido sobre cartuchos C18. Las ventajas aportadas por estos metodos consisten en su rapidez y en la poca cantidad de muestra que precisan. Para finalizar este trabajo, se han utilizado las técnicas quimiométricas como herramienta para interpretar los datos cromatográficos suministrados en el analisis de vitaminas y provitaminas liposolubles en leche de vaca. En concreto, se evaluó la repercusión de la enfermedad denominada mastitis subclinica en el contenido d