Estudio de diferentes anticuerpos monoclonales obtenidos por inmunización con eritorblastos de hígado fetal

Résumé

La presencia de células fetales en sangre materna constituye una intersante fuente de tejido fetal, puesto que su aislamiento permitiría realizar una diagnóstico prenatal no invasivo a todas las embarazadas. En esta memoria se estudia la capacidad de varios anticuerpos monoclonales, desarrollados por nuestro grupo de investigación, para el aislamiento de eritroblastos fetales de la sangre materna. Para ello, se describe la puesta a punto de un método de enriquecimiento celular por centrifugación en grandiente de densidad doble y posterior selección positiva mediante la técnia de separación celular activada por partículas magnéticas, MACS. En primer lugar , se seleccionan las condiciones más idóneas de centrifugación engradiente para el enriquecimiento de eritroblastos. Se comparan cuantro de nuestros anticuerpos para elegir aquel que aísle eritroblastos en la mayor cantidad de meustras posible. Se demuestra que uno de los cuatro anticuerpos ensayados es significativamente más efica que el resto, aislado eritroblastos en todas las muestras e sangre materna procesadas con él. Asímismo, se modifican las condiciones de la separación celular y la citocentrifugación para conseguir mayor recuperación de eritroblastos. Se demuestra, también, que a mayor tiempo transcurrido entre la extracción de la sangre y su procesamiento en el laboratorio, la recuperación de eritroblastos disminuye significativamente y se modifica la distribución celular enl as interfases del gradiente.Se comparan dos de nuestros anticuerpos con el anticuerpo anti-CD71 comercial más utilizado en la bibliografía demostrándose que nuestros anticuerpos recuperan un número significativamente superior de eritroblastos de sangre materna que el anticuerpo comercial en la mayoría de los casos, si ben dan lugar, en gen real, a preparaciones con mayor contaminación por otros tipos celulares. Se aplican técnicas de PCR y FISH para el diagnóstico del sexo