Expresión de los genes estructurales del virus de la gastroenteritis porcina trasmisible en saccharomyces cerevisiae

Resumo

SE HA ABORDADO EL ESTUDIO DE LA EXPRESION DE LOS GENES ESTRUCTURALES DEL TGEV EN S. CEREVISIAE MEDIANTE LOS SIGUIENTES PUNTOS: 1.- EL DISEÑO DE UN VECTOR DE EXPRESION Y/O SECRECION DE GENES HETEROLOGOS EN S. CEREVISIAE. TENIENDO EN CUENTA QUE SE NECESITARA UNA SECUENCIA SEÑAL HOMOLOGA DE LEVADURA PARA LA EXPRESION DE LOS GENES VIRALES, EN EL DISEÑO DEL VECTOR SE INCLUYO UNA SECUENCIA SEÑAL DE LEVADURA QUE ADEMAS NO HABIA SIDO PROBADA ANTERIORMENTE (MEL1). 2.- LA EXPRESION DE LOS GENES ESTRUCTURALES DEL TGEV EN S. CEREVISIAE, UTILIZANDO EL VECTOR PREVIAMENTE DISEÑADO O BIEN UTILIZANDO OTROS VECTORES DE LEVADURA. 3.- EL ESTUDIO DE LA PROPIEDADES ANTIGENICAS DE LAS PROTEINAS O PEPTIDOS RECOMBINANTES PRODUCIDOS. SE SUBCLONARON EN LOS VECTORES DE EXPRESION LOS GENES DEL TGEV QUE CODIFICAN LAS PROTEINAS N, E1 Y E2, ASI COMO VARIOS FRAGMENTOS DE ESTA ULTIMA. LA DETECCION DE LA PROTEINA N RESULTO MUY EFICAZ, EN CONTRASTE CON LA POBRE EXPRESION DE LAS PROTEINAS E1 Y E2. LA LOCALIZACION DE LOS PRODUCTOS RESULTO MAYORITARIAMENTE INTRACELULAR, LIGADA A FRICCIONES DE MEMBRANA, AUNQUE SE PUDO DETECTAR ASIMISMO LA PROTEINA N EN EL SOBREADANTE DE CULTIVO. PARA FACILITAR LA DETECCION DE LOS PRODUCTOS DE EXPRESION SE UTILIZO LA SECUENCIA DE DNA QUE CODIFICA EL DETERMINANTE ANTIGENICO DE LA PROTEINA N RECONOCIDO POR EL ANTICUERPO MONOCLONAL DA3 Y SE FUSIONO CON LOS FRAGMENTOS DE GENES A EXPRESAR EN LEVADURAS. DE ESTO MODO SE LOGRO UNA DETECCION EFICAZ, CON DICHO ANTICUERPO, DE LOS POLIPEPTIDOS RECOMBINANTES PRODUCIDOS EN LEVADURAS, ESPECIALMENTE LOS PERTENECIENTES A LA GLICOPROTEINA E2.