Sistema de manipulación genética de yersinia ruckeri aplicación para la selección de genes implicados en virulencia

Abstract

El desarrollo y extensión de la acuicultura ha llevado a un incremento de los problemas asociados con enfermedades infecciosas en peces cultivados. La yersiniosis, o enfermedad entérica de la boca roja (ERM), se encuentra entre las más importantes y provoca pérdidas económicas en todo el mundo. Su agente causal es la bacteria gram-negativa Y.ruckeri que infecta principalmente salmónidos. A pesar del desarrollo temprano de una vacuna elaborada a partir de células inactivadas con formalina (Stevenson, 1997), aún siguen apareciendo brotes bajo condiciones de estrés elevado o debido a una incorrecta manipulación. Son escasos los conocimientos que se tienen acerca de los mecanismos de patogenicidad utilizados por este microorganismo. Por ello, el objetivo fundamental de este trabajo ha sido inicialmente el desarrollo de las técnicas genéticas necesarias para llevar a cabo el estudio de dichos factores para, posteriormente, abordar el estudio de algunos de ellos. Entre estas técnicas destacan la introducción de ADN mediante conjugación o transformación, la interrupción génica y complementación de las mutaciones generadas y la adaptación de la técnica IVET para peces. Los medios de cultivo en laboratorio son una herramienta limitada para el estudio de los mecanismos moleculares implicados en la infección, ya que resulta muy difícil reproducir el complejo y cambiante ambiente del hospedador. Con el fin de superar estas limitaciones, Mahan y col. (1993) desarrollaron un sistema de selección genética denominado tecnología de expresión in vivo (IVET; in vivo expresión technology). Esta técnica es un sistema de captura de promotores que utiliza al hospedador como medio de selección y permite la identificación de genes que se expresan durante la infección pero no en condiciones de cultivo en laboratorio (genes ivi). En el presente trabajo se desarrolló el sistema IVET para su aplicación en peces utilizado el vect