Caracterización del virus de la enfermedad hemorrágica de los conejos. Identificación y expresión del gen de la proteína estructural vp60

Resumen

LA ENFERMEDAD HEMORRAGICA DE LOS CONEJOS FUE DESCRITA POR PRIMERA VEZ EN CHINA EN 1984 COMO UN PROCESO AGUDO, LETAL Y CARACTERIZADO POR UN SINDROME HEMORRAGICO. LAS PARTICULAS DEL AGENTE CAUSAL, EL VIRUS DE LA ENFERMEDAD HEMORRAGICA DE LOS CONEJOS (RHDV), SON ICOSAEDRICAS, POSEEN UN DIAMETRO DE 25 A 30 NM Y CARECEN DE ENVOLTURA LIPIDICA. LOS VIRIONES ESTAN FORMADAS POR COPIAS DE UNA UNICA PROTEINA DE 60 KDA (VP60) Y CONTIENE UN GENOMA DE RNAMC DE 7,5 KB Y POLARIDAD POSITIVA. LA SECUENCIA DE LOS 2483 NUCLEOTIDOS DEL EXTREMO 3' MOSTRO QUE LA VP60 DEL RHDV ESTA CODIFICADA EN EL EXTREMO 3' DE UNA GRAN PAUTA ABIERTA DE LECTURA QUE SE EXTIENDE A LO LARGO DE LA MAYORIA DEL GENOMA. A PESAR DE ESTO, EL RHDV PRODUCE UN RNAM SUBGENOMICO DE 2.4 KB, ENCAPSIDADO, COTERMINAL POR EL EXTREMO 3' CON EL GENOMA, Y QUE CODIFICA LA VP60. POR TANTO, LA VP60 VIRAL ES PRODUCIDA POR PROCESAMIENTO PROTEOLITICO DE UN PRECURSOR O POR TRADUCCION DEL RNAM SUBGENOMICO. LA SECUENCIACION DEL EXTREMO N-TERMINAL DE LA VP60 APOYA SU ORIGEN SUBGENOMICO. POR OTRA PARTE, LA VP60 HA SIDO PRODUCIDA EN ESCHERICHIA COLI COMO PROTEINA DE FUSION CON LA BETA-GALACTOSIDASA, OBSERVANDO QUE LA PROTEINA QUIMERICA RESULTANTE MOSTRABA IMPORTANTES DIFERENCIAS ANTIGENICAS CON LA PROTEINA NATIVA. SIN EMBARGO, LA VP60 RECOMBINANTE OBTENIDA EN UN SISTEMA BASADO EN LA RNA POLIMERASA DE T7 ERA ANTIGENICAMENTE SIMILAR A LA VP60 VIRAL COMO SE DETERMINO USANDO UN SUERO POLICLONAL Y ANTICUERPOS MONOCLONALES. ESTA VP60 RECOMBINANTE ERA CAPAZ DE INDUCIR PROTECCION CONTRA UNA DOSIS LETAL DEL VIRUS A LOS CONEJOS INMUNIZADOS CON ELLA. CUANDO LA VP60 ES PRODUCIDA EN SACCHAROMYCES CEREVISISAE BAJO EL PROMOTOR DEL GEN DE LA FOSFOGLICERATO QUINASA SE AUTOENSAMBLABA FORMANDO PARTICULAS SIMILARES MORFOLOGICAMENTE A VIRIONES.