Nuevas aplicaciones de sustratos indoxílicos en biosensores y en análisis clínicos

Laburpena

EL USO DE SUSTRATOS INDOXÍLICOS ESTÁ GENERALMENTE RELACIONADO CON LA REALIZACIÓN DE ENSAYOS CUALITATIVOS O SEMICUANTITATIVOS SONDE UN PRODUCTO INSOLUBLE Y COLOREADO ES DEPOSITADO SOBRE UN SUSTRATO SÓLIDO. EN ESTA TESIS DOCTORAL SE EMPLEAN SUSTRATOS ENZIMÁTICOS INDOXÍLICOS EN ENSAYOS CUANTITATIVOS HACIENDO USO DE TÉCNCIAS ELECTROQUÍMICAS Y OPTICO.ESPECTROSCÓPICAS. SE MUESTRAS LA POTENCIALIDAD DE UTILZIAR EL SUSTRATO 3-INDOXIL FOSFATO COMO SUSTRATO DE LA PEROXIDASA UNIDO A LA POSTERIOR CUANTIFICACIÓN DEL AZUL DE ÍNDIGO PREVIA SULFONACIÓN CON ÁCIDO SULFURICO CONCENTRADO. LA DETERMINACIÓN DEL DERIVADO SOLUBLE, INDIGO CARMÍN, SE REALIZA POR TÉCNICAS VOLTAMPEROMÉTRICAS SOBRE ELECTRODOS SERIGRAFIADOS DE CARBONO Y SE DEMUESTRA LA POSIBLIDAD DE UTILIZAR ESTA METODOLOGÍA EN INMUNOENSAYOS TIPO ELISA PARA LA DETERMINACIÓN DE NEUMOLISINA. SE PRESENTA TAMBIÉN LA POSIBILIDAD DE SOLUBILIZAR EL AZUL DE INDIGO EN PRESENCIA DE UN AGENTE REDUCTOR EN UN MEDIO BÁSICO, PROCEDIENDO A CUANTIFICAR FINALEMNTE EL LEUCOÍNDIGO GENERADO POR TÉCNICAS ELECTROQUÍMICAS SOBRE ELECTRODOS DE PASTA DE CARBONO O HACIENDO USO DE TECNICAS COMO LA FLUORESCENCIA MOLECULAR O LA ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN MOLECULAR. SE PLANTEA TAMBIÉN EL USO DE SUSTRATOS INDOXÍLICOS EN COMBINACIÓN DE IONES PLATA COMO UN NUEVO SUSTRATO DE LA FOSFATASA ALCALINA. A TRAVÉS DE ESTA REACCIÓN SE GENERA UN COPRECIPITADO DE PLATA METÁLICA Y DE AZUL DE INDIGO, AUNQUE LA MEDIDA DE LA PLATA METÁLICA POR REDISOLUCIÓN ANODICA PERMITE LA REALIZACIÓN DE GENOSENSORES ELECTROQUÍMICOS DE ALTA SENSIBILIDAD.