Clonación y caracterización del operón de las proteínas ribosómicas l13 y s9 de streptomyces coelicolor a3 (2)

Abstract

UN ANALISIS MEDIANTE ELECTROFORESIS BIDIMENSIONAL DE LAS PROTEINAS RIBOSOMICAS DE STREPTOMYCES COELICOLOR A3(2) REVELO QUE DOS PROTEINAS DEL MICELIO SUSTRATO NO SE DETECTABAN EN LOS RIBOSOMAS DEL MICELIO AEREO. A PARTIR DE LA SECUENCIA DE DOS PEPTIDOS DE UNA DE DICHAS PROTEINAS (RP3), DISEÑAMOS OLIGONUCLEOTIDOS DEGENERADOS QUE NOS PERMITIERON CLONAR SU GEN. LA SECUENCIA DE ADN MUESTRA DOS FASES DE LECTURA ABIERTA, RPLM Y RPSI, CUYOS PRODUCTOS DEDUCIDOS SON SIMILARES A PROTEINAS RIBOSOMICAS L13 Y S9, RESPECTIVAMENTE, DE DIVERSOS ORGANISMOS. EL PRODUCTO DE RPSI ES LA PROTEINA DIFERENCIAL RP3, PUES CONTIENE LAS SECUENCIAS PEPTIDICAS DE PARTIDA. EXPERIMENTOS DE MAPEO TRANSCRIPCIONAL SUGIEREN QUE RPLM Y RPSI FORMAN UNA UNIDAD TRANSCRIPCIONAL. AMBOS GENES FUERON SOBREEXPRESADOS EN ESCHERICHIA COLI Y SUS PRODUCTOS PURIFICADOS. SE EMPLEARON ANTICUERPOS POLICLONALES FRENTE A LAS PROTEINAS PURAS PARA ANALIZAR LA PRESENCIA DE AMBAS EN LOS RIBOSOMAS DE LA BACTERIA. LA CONCENTRACION DE RP3 DISMINUYE PROGRESIVAMENTE DURANTE LA TRANSICION DEL MICELIO SUSTRATO AL MICELIO AEREO, SIENDO APARENTEMENTE SUSTITUIDA POR UNA SEGUNDA FORMA DE S9 DE MENOR MASA MOLECULAR. EXPERIMENTOS DE TRANSCRIPCION-TRADUCCION ACOPLADAS SUGIEREN QUE LOS GENES RPLM Y RPSI ESTAN ACOPLADOS TRADUCCIONALMENTE.