Análisis molecular de la carboxipeptidasa s de la levadura de fisión schizosaccharomyces pombe

Resumen

En la tesis presentada se ha clonado por complementación funcional el gen cps1+,codificador de la carboxipeptidasa S de la levadura de fisión Schizosaccharomyces pombe, secuenciandose toda la pauta abierta de lectura y las regiones 5¿y 3¿flanquantes. La proteína codificada pertenece a la familia M20 de metalocarboxipeptidasas, habiendose localizado residuos implicados en la unión del metal y en la actividad catalítica del enzima. Mediante extensión del cebador se identificó el sitio de inicio de la transcripción para el gen cps1+, localizado en la posición -194, a partir del cual sugerimos que la secuencia que actúa como caja TATA en el promotor se sitúa en la posición-367. Se ha estudiado la expresión del gen mediante Análisis Northern realizado en diferentes condiciones nutricionales y ambientales. Se ha comprobado que los niveles del ARN mensajero correspondiente se elevan significativamente en presencia de fuentes de nitrógeno. Este compportamiento es típico de genes sometidos a un sistema genérico de control transcripcional denominado Represión Catabólica por Nitrógeno. Se han identificado y comprobado la funcionalidad, mediante ensayos de retardo en la movilidad electroforética, tres partes de secuencias consenso de unión a factores de transcripción pertenecientes a la familia GATA. Se han identificado varios de estos factores trans implicados en la regulación de la expresión del gen y se han purificado algunos de ellos mediante cromatografía de afinidad, utilizando extractos proteicos obtenidos de células en condiciones desrepresoras.