Cuantificación de aductos de ADN inducidos por cisplatino y evaluación del efecto de la selenometionina en la nefrotoxicidad del fármaco in vivo

Résumé

El empleo del cisplatino en los tratamientos de quimioterapia ha obtenido grandes logros durante los últimos años. Sin embargo, aún existen muchas incógnitas por resolver respecto a su mecanismo de acción y los fenómenos de resistencia y toxicidad asociados al empleo de este fármaco. En este sentido y puesto que la actividad citotóxica del cisplatino deriva de su interacción con el ADN para formar aductos, el conocimiento de los niveles y tipos de aductos formados (aspectos cualitativos y cuantitativos) es fundamental para una comprensión completa de cómo las células responden al fármaco. Además, se podría establecer si existe una correlación entre el nivel de aductos y la eficacia antitumoral y/o toxicidad del fármaco, de manera que dicho nivel se pueda utilizar como indicador para predecir la respuesta de un individuo a la quimioterapia con cisplatino antes de someter al paciente al tratamiento. Paralelamente, es necesario investigar el uso de compuestos que aminoren la nefrotoxicidad del fármaco, que representa uno de los factores limitantes en su utilización. Todos estos estudios pueden proporcionar una información muy valiosa para mejorar las estrategias terapéuticas en el tratamiento con cisplatino y para avanzar en el desarrollo de nuevos fármacos derivados del platino. Por todo ello, el objetivo general de la presente Tesis Doctoral consiste en: La puesta a punto de metodologías analíticas adecuadas para la identificación y cuantificación de aductos de ADN inducidos por cisplatino y su correlación con la toxicidad del fármaco a nivel del genoma (genotoxicidad). Las investigaciones más destacadas desarrolladas en la presente Tesis Doctoral se pueden resumir en los siguientes puntos: 1-Se han desarrollado metodologías de HPLC-ICP-MS para la separación y detección de los aductos del cisplatino formados por reacciones in vitro con nucleótidos, oligonucleótidos y ADN comercial y su identificación estructural a través del empleo de la técnica de ESI-Q-MS. 2-La metodología desarrollada se adaptó para la determinación de los aductos del cisplatino con el ADN inducidos in vivo utilizando como organismo modelo Drosophila melanogaster: de la HPLC convencional a la µHPLC. 3-Se han desarrollado estrategias analíticas cuantitativas basadas en análisis por dilución isotópica mediante HPLC-ICP-MS para la determinación exacta y precisa de los aductos de cisplatino con el ADN y se ha evaluado su aplicabilidad in vivo. 4-Las metodologías de dilución isotópica desarrolladas se han aplicado para llevar a cabo la cuantificación de los aductos del cisplatino-ADN en Drosophila melanogaster en diferentes condiciones de reparación. Además, estos niveles de aductos se han correlacionado con los resultados de los ensayos del Cometa y w/w+ SMART de ojos. 5-Se llevó a cabo el estudio de la formación de los aductos de ADN-cisplatino en hígado y riñón de mamíferos a través de las metodologías propuestas: efectos protectores de la selenometionina para aminorar la toxicidad del fármaco.