Gen de la sulfatasa esteroidea (sts)clonaje, expresion y mapping

Zusammenfassung

La sulfatasa esteroidea (sts) es una enzima microsomal que escinde grupos sulfato de las formas inactivas (sulfatadas) de varias hormonas esteroideas. Esta desulfatacion de esteroides juega un papel importante en varios procesos fisiologicos tales como la maduracion de celulas epidermicas, la gestacion y la respuesta inmune, y podria, ademas, estar implicada en la patogenesis de canceres esteroide-dependientes, como es el carcinoma de mama. El cdna de la sts humana ha sido clonado y el gen posicionado en las proximidades de la region pseudoautosomica del brazo corto del cromosoma x humano (xp22.3). El deficit de la sts en humanos se asocia a la enfermedad ictiosis ligada al x. Para profundizar en el conocimiento de esta enzima y las anomalias asociadas a su deficit se hace precisa la experimentacion animal, y para ello hacen falta reactivos moleculares para el analisis de la sts de rata y raton. Objetivos: 1.- clonaje molecular y secuenciacion del cdna de sts de raton. 2.- expresion del gen sts en diferentes tejidos de raton durante el desarrollo. 3.- expresion del gen sts del cromosoma x inactivo. 4.- mapping genetico y fisico del gen sts murino. Metodologia: 1.- clonaje molecular del gen de la sulfatasa esteroidea (sts) de raton a partir de genotecas de cdna de higado, usando como sonda un fragmento de cdna de rata previamente clonado mediante pcr con primers degenerados. 2.- expresion del gen de la sulfatasa esteroidea en diferentes tejidos durante el desarrollo mediante northern blot e hibridacion in situ. Expresion de sts en el cromosoma x inactivo mediante rt-pcr en celulas hibridas somaticas hamster-raton. Expresion del cdna de raton clonado en celulas a9 (sts-). 3.- mapping genetico del sts murino mediante cruces interespecificos (panel de dna de los laboratorios jackson), y cruces subespecificos (cepas sw y c3h/an). Mapping fisico mediante southern blot de dna de celulas hibridas hamster-raton e hibridacion in situ